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[猪病技术] 荷兰某猪场实验验证检测唾液中蓝耳病毒和蓝耳抗体所需绳索数

  综合诊断实验室对唾液中蓝耳病的PCR检测和ELISA抗体检测进行优化和应用。考虑到场内的实际应用,有必要在猪群里做唾液抽样,来确认其相对敏感性和特异性的流行病学。这个验证实验为猪场在蓝耳病爆发后或者小面积流行时的ELISA检测或者PCR检测所需最少绳索数提供了依据。


  材料与方法


  共收集了37个猪场的101份唾液样品和1088份血清样品(这些猪场是在了解其PRRSV发病史的基础上由兽医挑选的)。从采样到送至实验室不超过48小时,共挑选唾液样品42份(表1)。


  表1



  血清样品用爱德士PRRSVX3试剂盒做ELISA检测抗体,实时PCR检测病毒,同时也设计了唾液优化实验草案。根据栏舍间流行(pp,有1头或者更多头PRRSV阳性小猪的栏舍数)和栏舍内流行(wpp,每个栏舍阳性小猪的数量),决定用同一猪只血清样品的ELISA和PCR结果和其唾液样品的检测结果做对比。并用Stata12和Winepiscope2统计分析唾液抽样的敏感性和特异性。


  5个猪舍,每个猪舍有10个猪栏,每个猪栏有10头小猪,共计500头8-10周龄的断奶后小猪,预计小面积流行或是大面积流行所需的绳索数量(小面积流行:10%≤wpp<50%,大面积流行:wpp≥50%)。


  结果


  ELISA:10个猪场共22个栏舍中,有19个栏舍至少有1个阳性血清样品,pp为86%,其中有15个栏舍疫情大面积流行(wpp≥50%)。全部唾液样品中,有13份的ELISA检测结果呈阳性。唾液抽样法的敏感度是68%,(CI:95%:48-89%)。有4个栏舍的栏舍内流行率低、10%≤wpp<50%,在唾液中检测不到抗体。


  PCR:14个猪场共42个栏舍中,有21个栏舍至少有1个阳性PCR血清样品,pp为50%(CI:95%:34%-66%),唾液检测结果也为阳性的有15个栏舍,敏感度为71%(CI:95%:52-91%)。42个栏舍中,3个猪场的13个栏舍疫情大面积流行(wpp≥50%),所有唾液检测结果都为阳性,唾液抽样的敏感度为100%。


  当所有猪舍的wpp小于50%时,敏感度是25%,(CI:95%:0-50%)。


  在疫情大面积流行的情况下,当wpp≥50%、pp介于80-90%时,检测蓝耳抗体和病毒需要2-3根绳索。


  当栏舍内流行在小面积到大面积流行之间时,则需要4-7根绳索。


  当wpp小于50%时,唾液抽样法不能检测抗体或者病毒。在小面积流行的栏舍中,即使有1个栏舍的血清样品检测为阳性,混合血清样品的检测结果也是阴性的高达75%。


  结论与讨论


  唾液抽样法是预警蓝耳疫情爆发的有效方法,仅需2-3根绳索为其诊断提供可靠的信息。当pp和wpp减少时,检测抗体和病毒需要的绳索数就会增加。


  基于这次试验的数据,唾液抽样法不适合用于PRRSV小面积流行。然而这些数据缺乏统计学意义。本文只收集了4个栏舍的抗体数据和8个栏舍的病毒数据(0<wpp<50%)。因此,还需要进一步地研究在小面积流行的情况下,唾液抽样法的有效性。


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